Électrophorèse
L'électrophorèse permet de séparer les fragments d'[[ADN]] en fonction de leur taille.
- L'ADN étudié et l'étalon sont posés sur un gel de polysaccharide (comme d'agarose).
- On applique un courant électrique. Les séquences d'ADN seront attirées par la borne + (anode) à cause de la charge - des groupements phosphates.
- Les fragments d'ADN sont rendus visibles grâce au BET (bromure d'éthidium), une substance qui s'intercale entre les brins d'ADN.
La distance parcourue par un morceau d'ADN dépend de sa taille que l'on détermine en comparant avec la gamme étalon.
Note
Un procédé similaire est utilisé pour séparer les protéines en fonction de leur taille et leur charge.
La taille est déterminée à l'aide d'une gamme de référence. Les séquences migrent d'autant plus lentement à travers le réseau de fibres de gel qu'elles sont longues.
Warning
L'intensité de la bande varie avec la taille des fragments. Ce qui rend la quantification délicate.
Électrophorèse sur des plasmides
En électrophorèse, un plasmide peut avoir trois conformations :
- Relâché (linéaire).
- Super-enroulé.
- Ouvert.
Électrophorèse
Séparer les protéines en fonction de la
| Taille (dénaturée) | Charge (non dénaturée) |
|---|---|
| Gel | Papier |
Chargé
On dépose les protéines en ligne au milieu d'une feuille de papier et on applique un courant électrique sur les deux extrémités de la feuille. Les protéines se trouveront plus ou moins proche des bornes en fonction de leur charge.
| Borne | Charge de la borne |
|---|---|
| Anode | + |
| Cathode | - |
Taille
Pour comparer la taille des protéines, on doit d'abord les dénaturer.
On applique un courant électrique qui va provoquer la migration des protéines. Plus elles seront proches du ? sont petites.
La taille des protéines est déterminée par une gamme étalon.