Absorbance

La spectrométrie permet de :

• déterminer la concentration d'une molécule.
• suivre la cinétique de formation d'un produit lors d'une réaction enzymatique.
• suivre l'élution de molécules lors de la séparation d'un mélange par chromatographie.
• analyser le degré de pureté d'une molécule.

Note

Pour suivre l'évolution d'une réaction chimique, il est possible soit de suivre l'apparition du produit ou la disparition du substrat

Élution séparation de deux substances. Le produit utilisé comme solvant est appelé éluant.

Loi de Beer-Lamber

\(\(A = \log{\frac{I_0}{I}} = e.l.c\)\) Avec : * \(e\) coefficient d'extinction molaire, spécifique de la substance absorbante (en \(M^{-1}.cm^{-1}\)). * \(l\) épaisseur de la cuve (en cm). * \(c\) concentration de la substance absorbante (en \(Mol\) ou \(mol.L^{-1}\)). * \(A\) absorbance ou densité optique (sans unité).

Le matière qui constitue la cuve dépend de la longueur d'onde utilisée. Pour les longueurs d'ondes comprise entre :

• 190-400 nm quartz.
• 400-800 nm plastique, verre.

Les étapes pour réaliser une spectrométrie :

1. Régler l'absorbance avec l'échantillon de solvant pur.
2. Réaliser les mesures. Elles ne sont valables que pour \(0,1 \lt A \lt 1\).

Note

A chaque fois que l'on modifie la longueur d'onde, il faut régler l'absorbance pour le solvant pur (faire le blanc) ou utiliser un spectrophotomètre bi-faisceau.