[[protéine]] Les principales informations à déterminer sur une protéine :

• localisation
• rôle
• quantité

Aussi : les protéines avec lesquelles elle interagit,

Protéine de fusion (ou chimérique) combinaison de séquences de gènes pour former une protéine chimérique.

Warning

L'utilisation d'une protéine chimérique nécessite de réaliser une contrôle pour vérifier qu'elle a un comportement proche de la protéine endogène.

Protéine de ménage protéine dont le niveau d'expression ne varie pas entre les conditions expérimentales et souvent entre les types cellulaires. Les protéines de ménages les plus utilisées sont, la tubuline.

Tampons :

• [[découper des protéines en peptides]]
• [[purifier et séparer les protéines]]
• [[quantifier les protéines]]

Supprimer l'expression

Pour supprimer la présence d'une protéine, il est possible d'avoir recours à :

• L'utilisation un individu mutant avec un gène KO codant pour la protéine d'intérêt.
• De l'ARN interfèrent qui s'hybride avec l'ARNm de la protéine d'intérêt. Il empêche sa synthèse par les ribosomes et conduit à sa destruction.

Révéler une protéine

Pour révéler la présence de protéines, il est possible de les colorer par :

• Bleu de Coomassie (non spécifique)
• Anticorps (spécifique)

Épitope région de fixation de l'anticorps.

Identifier une protéine d'intérêt

Il existe deux méthodes principales pour identifier une protéine d'intérêt :

• Immunoessaie
• Western blot

Warning

Ces méthodes permettent de réaliser une quantification mais elles ont tendance à

Pour révéler la présence de protéines, il est possible de colorer par :

• Bleu de Coomassie (non spécifique)
• Antigène (spécifique).

Épitope région de fixation de l'anticorps.

Westernblot

Le Westernblot est une méthode combinatoire :

1. Électrophorèse sur gel.
2. Transfert sur une membrane.
3. Coloration de la protéine d'intérêt grâce à des anticorps.

Il existe deux types de migration sans différence notable.

• Semi sec
• Humide

Immunoessaie

Immunoessaie ou technique immuno-enzymatique (appelé aussi ELISA) permet de déterminer la présence et la quantification. Cette méthode s'appuie sur la reconnaissance entre un anticorps et un antigène.

Avantage : test simple, facile d\'emploi et peu coûteux

Inconvénients : ça réalisation dépend des anticorps disponibles sur le marché.

Les méthodes d'études des protéines

Ces méthodes servent à identifier une protéine d'intérêt.

Pour dénaturer (déplier) une protéine, il faut utiliser deux types de substances :

• Des agents réducteurs qui suppriment les ponts disulfures
• Des dénaturants de suppriment les liaisons non covalentes (hydrogène ou Van der Vaal).

Vocabulaire

Ne pas utiliser le terme tache. On parlera de bande ou de spot.