Culture de cellules eucaryotes

Les éléments dont ont besoins une cellule pour survivre dépendent de son type. La sélection de types cellulaires se fait par la composition du milieu.

Milieu de culture

Le milieu est composé :

• d'un milieu nutritif (généralement du DMEM). Certains nutriments vitaux comme le glutamate, un aa, ont une durée de demi-vie faible. Il faut soit en ajouter régulièrement soit utiliser des dérivés plus stables comme le GLutamax.
• du sérum animal (par exemple de veau ou de cheval) qui apporte de nombreuses molécules annexes comme des facteurs de croissances, des acides gras, du fer... Le sérum a une composition variable.
• Antibiotiques (comme la pénicillines et la streptomycine) pour prévenir du développement bactérien.

Rappel : Osmolarité des cellules animales 300mOsmol/L.

Lignée cellulaire cellule rendue immortelle.

Coat substrat qui facilite l'adhésion composant de la [[matrice extracellulaire]].

Note

La glutamine est impliquée dans de nombreux processus notamment dans la fabrication des pyrimidines et de la purine (les précurseurs des nucléosides). Mais elle est extrêmement labile. Son temps de demi-vie est très faible et trop délétère car il se transforme en ammoniac.

Confluence proportion de cellules ayant adhérée au support. % de l'espace occupé par les cellules.

pH tendance à basique en division importante pensez à acidifier le milieu. Dans les incubateurs, le pH est maintenu par la présence de \(CO_2\).

Isoler les cellules

Pour isoler un type cellulaire, il existe deux techniques :

• par explant. Des cellules émergent de l'explant.
• par digestion enzymatique. On digère les composants pour dissocier les cellules et les isoler.

L'amplification de la culture d'un type passe par la composition du milieu.

1. Faire adhérer les cellules.
2. Migration et prolifération (dynamisme du cytosquelette, intégrine).

Note

Pour décrocher les cellules du tissu ou de leur support, on utilise généralement la trypsine (endopeptidase) qui présente l'avantage d'avoir une efficacité élevée.

Conservation des cellules

Pour conserver les cellules, elles sont congelées. Les paramètres à surveiller sont :

• la vitesse de congélation qui vitesse d'apparition des cristaux augmentent intracellulaire.
• utiliser des agents de cryoprotecteurs comme le DMSO ou le glycérol qui abaissent le point de congélation de l'eau.

Note

Les cristaux de glace sont constitués d'eau pur.

Warning

Les cryoprotecteurs sont généralement des substances toxiques.

Les cellules doivent être :

• décongelées rapidement pour limiter l'impact des cristaux.
• d pour limiter les effets du DMSO.