Blot

Western Blot ou buvard de western

Il permet de détecter et d'identifier les protéines et leur concentration. Il faut préalablement dénaturer les protéines.

1. Séparation : Les [[protéine]] sont séparées par taille par électrophorèse.
2. Transfert : Elles sont ensuite transférées sur un gel en appliquant un courant électrique.
3. Révélation : On ajoute un anticorps spécifique à la protéine étudiée puis d'un anticorps secondaire capable d'émettre de la lumière en présence d'un substrat.

L'intensité lumineuse permet de connaitre la concentration.

Identifier une séquence de nucléotides : le buvard de Southern

Le buvard de Southern sert à révéler une séquence d'[[ADN]] particulière. Il se déroule en trois étapes :

1. [[électrophorèse]] sur gel.
2. transfert sur buvard en utilisant une solution alcalin (basique). Le buvard est posé sur le gel.
3. hybridation avec une sonde radioactive complémentaire du gène pour les visualiser la séquence d'intérêt.

Note

On peut augmenter la fidélité de l'hybridation de la sonde lors d'un Southern blot en augmentant la température et en diminuant la teneur en sels (ce qui a pour effet de neutraliser les charges et ainsi de limiter les liaisons d'hydrogène).

Buvard de Nothern identification d'une séquence d'[[ARN]]. Le buvard de Nothern est un buvard de Southern avec au début, une transcription inverse puis une amplification en chaine polymérase ou RT-[[PCR]].